科研人员在完成Western blot实验后,通常需对结果图像进行扫描并开展灰度分析。Image J是常用分析软件之一。本文将介绍如何利用Image J对Western blot实验结果进行有效分析,帮助提升数据处理的准确性和效率。
1、 在百度搜索并下载安装Image J软件,完成后将WB实验的胶片进行扫描,获取数字图像以便后续分析处理。
2、 完成第一步后,安装并打开Image J软件,点击菜单栏的File,选择Open导入扫描图片。随后点击Image菜单,下拉找到Type选项,点击后将其转换为8-bit模式,以便后续图像处理操作顺利进行。
3、 点击analyze菜单,向下选择set measurement,在弹出窗口中勾选图示的四个项目,确认后点击ok。接着点击process菜单,下拉后选择substract background,在新窗口中仅勾选light background一项,其余不选,设置完成后点击ok执行操作即可完成背景扣除。
4、 完成第三步后,点击analyze,在下拉菜单中选择set scale,随后会弹出一个对话框,将unit of length输入框中的英文内容更改为pixels,然后点击确定即可完成设置。
5、 完成前四步后,点击文件下方的一系列不规则圆形,选中心形图标,进入自由选择模式。接着点击编辑菜单,下拉找到反选选项并点击确认操作即可。
6、 最后进行灰度统计,用鼠标圈选图像中的亮色区域,尽量完整覆盖。随后点击Analyze菜单中的Measurement选项,系统将自动弹出所选区域的灰度统计结果。

